EXTRACCIÓN DE ADN DE PULPA DE PLÁTANO

EXTRACCIÓN DE ADN DE PULPA DE PLÁTANO 

 Realizado por: María Cruz Arroyo, Verónica López Sánchez y Rocío Puerta Castro. (Isabel Roldán Arroyo no ha participado en este blog)

 Objetivo:
En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de las células de pulpa de plátano poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de larguísimas cadenas de esta molécula.

 Fundamento:

El ADN se encuentra en el interior del núcleo de todas las células, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina. Por lo tanto, podremos extraerlo a partir de prácticamente cualquier material de origen biológico. Para ello es necesario homogeneizar el tejido disgregándolo y separando sus células y demás componentes, luego romper las células para separar el núcleo y romper éste para liberar el ADN, separarlo de las proteínas y precipitarlo para separarlo de la solución acuosa.

El ADN (y también algo de ARN) aparecerá entonces como un agregado de fibras blanquecinas de aspecto mucoso que se adhieren a una varilla de vidrio o a la pipeta. Podemos añadir unas gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo para teñirlo. Por último, se puede situar sobre un porta, teñirlo de la misma manera y observarlo al microscopio. También se puede conservar dejándolo secar sobre papel de filtro o suspendido en alcohol al 50% o 70%.

 Materiales:

   -Plátano
   -Tenedor
   -Detergente tipo lavavajillas
   -Papel de filtro
   -Cristalizador
   -Agua destilada
   -Alcohol 95º
   -Sal
   -Vaso de precipitado
   -Cuchara
   -Embudo

          Procedimiento:

• Batir un plátano en 250 ml de agua destilada durante 15 a 20 segundos hasta obtener una papilla homogénea.
•  Por otra parte, en un vaso de precipitado pequeño se mezcla una cucharada de lavavajillas líquido con dos pizcas de sal de mesa.
• Añadir 20 ml de agua destilada a la mezcla de champú y sal.
• Añadir ahora tres cucharaditas del puré de plátano a lo anterior y mezclar con la espátula durante 5 ó 10 minutos evitando formar espuma.
• Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico por cada grupo y poner a enfriar lo máximo que sea posible, por ejemplo en baño de agua con hielo. Mejor aún si se ha mantenido refrigerado hasta el momento de realizar la práctica.
• Con los pasos anteriores hemos conseguido liberar el ADN en la disolución acuosa, la cual contendrá también diversos restos tisulares y celulares. Para eliminar esos restos dejamos filtrar la solución durante varios minutos en papel de filtro, filtro de cafetera o un paño de algodón suave, hasta obtener unos 5 ml de filtrado

SEPARACION DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFIA

REALIZADO POR: Maria cruz arroyo , Verónica lopez sanchez, Isabel roldan arroyo y Rocio puerta castro 

Teoría:
La cromatografía en papel se utiliza para separar líquidos o gases en diferentes componentes. El proceso de cromatografía tiene dos fases distintas: una fase estacionaria y una fase liquida.
La cromatografía en papel es parte de la fase estacionaria. En la cromatografía en papel es parte de la fase estacionaria en esta se utiliza papel absorbente especial para probar los elementos de una mezcla para ayudar a determinar su pureza.

^Pigmentos^
Sustancia colorante que, disuelta en forma de gránulos, se encuentra en el citoplasma de muchas células vegetales y animales. 
Se encuentran en el interior de las células vegetales, en una organela llamada cloroplasto. Los cloroplastos son simplemente plásmidos que contienen pigmentos clorofílicos que están ligados químicamente con las estructuras internas del cloroplasto (membrana tilacoides) y se halla retenidos en estado coloidar. Asociados con las clorofilas, existen también en los cloroplastos dos clases de pigmentos:
- Amarillos
- Amarillo-anaranjado que son los xantofilas y carotenides.

Materiales:
 -Mortero.  
 -Arena de cuarzo.     
 -Placa de Petri.
 -Papel de filtro.
 -Matraz.
 -Embudo de vidreo y embudo de papel.
 -Alcochol de 96º
 -Hojas de espinacas,perejil,hierbabuena,etc,...

*Procedimiento 

 1. Lavar las hojas de espinacas, retirar los nervios y ponerlas en un mortero, junto con el alcohol y una pequeña cantidad de carbonato cálcico (que evita la degradación de los pigmentos fotosintéticos). 

 2. Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso.  

 3. Filtrar con un embudo y papel de filtro.

 4. Colocar el filtrado en una placa Petri, y sobre ella pon un rectángulo de unos 15 centímetros de ancho por 10 centímetros de alto doblado en V para que se mantenga en pie sobre la placa de Petri.

 5. Dejar así el montaje y esperar unas horas. Los pigmentos se irán separando según su adsorción. 

6. Al observar el papel donde hemos hecho la cromatografía, vemos cuatro bandas o zonas (figura A), que corresponden a los distintos pigmentos fotosintéticos presentes en las hojas de espinaca. Según su grado de solubilidad con el alcohol se reconocen estas bandas y en este orden: clorofila b clorofila a xantofila carotenos

Figura A

Este es el aspecto final de la cromatografía obtenida con las hojas de espinacas